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超敏ECL發光液
所屬分類:western實驗應用試劑相關產品

產品型號:飛克級超敏ECL發光液

產品介紹
 超敏ECL發光液使用說明書

(初次使用本產品請仔細閱讀本說明書)

    western實驗中,檢測靈敏度是很重要的參數,而發光底物的發光效率很大程度的決定了western檢測靈敏度,培清科技開發的此超敏ECL發光液,作為HRP的底物,其發光效率高于Pierce SuperSignal West Dura的發光液16倍??蓹z測最低值15飛克抗原。并且其本底發光遠低于Pierce SuperSignal West DuraMillipore immobilon ECL,本發光液支持長時間曝光。另外,本產品穩定性高支持室溫存放。包裝規格:A 25ml B 25ml 4或室溫保存,室溫一年,4℃兩年有效。

使用說明:
1. 超敏ECL發光液工作液的配制:等體積混合適量A液和B液,室溫放置備用。工作液宜在臨檢測前配制。
2. Western
二抗孵育后,并進行數次洗滌后,用平頭鑷將膜取出,然后置于一潔凈保鮮膜或本公司配贈的曝光夾膜上。
3.
根據膜的大小,按每10平方厘米膜加0.5ml 工作液,滴加工作液到膜上,確保使工作液均勻覆蓋在膜上。
4.
取膜,棄工作液,將膜放在兩片保鮮膜中間或本公司配贈的曝光夾膜內,隨后進行壓片檢測或化學發光成像儀檢測。
5.
壓片檢測:將膜固定于片夾內。暗室內壓片10-10分鐘,立即顯影定影,根據結果再調整壓片時間?;蛑苯尤?/span>3X光片疊加在一起進行曝光,然后一起顯影定影觀察結果。

6.
熒光成像儀檢測:將膜放置到化學發光成像儀內,參考儀器說明書進行檢測。

注意事項:

1, A液和B液在吸取過程中必須要更換槍頭,A液和B液相互污染后會導致A液或B液逐漸失效,影響后續的使用效果。
2, 部分塑料材料或染料具有熒光淬滅的副作用,保鮮膜為食品級PP材料,不產生熒光淬滅的效應,但保鮮膜太柔軟易褶皺,操作麻煩,并易造成背景因褶皺產生的不均勻,推薦客戶使用曝光夾膜進行western曝光操作,此膜雙層硬質高透光(透光率高于97%),熒光不淬滅,不會褶皺,信號更均勻,操作簡單。

3, 由于本發光液靈敏度高,一抗和二抗濃度大時易造成高背景,推薦使用培清科技低背景封閉及抗體增敏稀釋液,可有效降低背景。二抗濃度直接決定背景深度,羊抗兔羊抗鼠HRP二抗,若使用培清科技的產品,統一1:100001:5000,其他品牌二抗須由客戶測試后確定。若客戶需要將膜上抗體剝離掉進行其他抗原檢測,此時務必使用培清科技開發的膜上抗體高效剝離液,其他品牌的剝離液經培清科技內部檢測,基本都不可以去除膜上殘余信號,并且大多傷害膜上抗原。

附:一,不同品牌發光液發光時間及靈敏性測試:

將本公司羊抗兔二抗(0.5mg/ml)PBS稀釋20000倍后,4倍倍比稀釋9次,各取1.5ul點于NC膜上(PALL,0.22um),室溫放置10min后,加入不同品牌發光底物,其中1為培清科技本產品,2millipore immobilon ECL,3pierce SuperSignal West Dura, 4pierce ECL底物。通過即刻曝光10秒和50秒來比較不同發光液靈敏性,之后將此含有發光底物的膜靜置50分鐘后再次檢測,以比較不同發光液的發光持續時間,檢測設備為制冷CCD化學發光成像儀(2x2像素合并)。
結果表明,培清科技超敏發光液檢測靈敏度遠高于其他國際著名品牌(其中高于pierce ECL 16倍),并且支持長時間曝光,而millipore immobilon ECLpierce ECL會隨時間快速衰減,pierce SuperSignal West Dura也可比較持久發光,但靈敏度低于培清科技本產品4倍。

歡迎廣大客戶一起重復此簡單實驗,不僅可掌控本實驗室發光液質量,也可質控二抗質量。

二,不同發光液本底發光情況測試

剪去4小片NC膜(pall 0.22um),在其上直接滴加上述實驗所用的四種發光液,發光液對應編號1,2,3,4也與上述實驗一致,先利用外部反射光源對4NC膜進行拍照,記錄位置,再關掉外部光源利用制冷CCD拍照5分鐘,獲得以下結果。
結果表明,培清科技超敏發光液(對應1號)發光本底遠低于其他著名品牌(對應2,3,4號),可以推論,之前客戶使用進口的靈敏度比較高的發光液,很容易產生整張膜高背景,如果排除封閉液質量不高,洗膜不徹底這兩大因素,發光液本底高背景為一個原因??蛻艚鉀Q高背景的手段是稀釋一二抗,但這是以犧牲檢測靈敏度為代價的。

 三,封閉液,漂洗液,發光液影響western背景的多因素測試




我們設計了客戶可方便重復的簡單實驗,選取4

小片NC膜(pall 0.22um),分別用5%光明牌脫脂奶粉TBST溶液封閉(下圖左側兩膜)和自主開發的western低背景封閉及增敏稀釋液進行封閉(下圖右側兩膜),室溫封閉30分鐘后,直接加入HRP標記二抗(1:5000稀釋),室溫孵育1h,之后分別用傳統的TBST緩沖液洗膜(下圖上方兩膜)和改進的TBST洗膜液洗膜(下圖下側兩膜),漂洗兩次,每次10分鐘。之后加入millipore immobilon ECL進行曝光,曝光時間4.5min,曝光后4張膜用PBS快速漂洗兩次,加入本超敏發光液,進行曝光,曝光30sec,從而獲得以下結果。另外本實驗中的傳統TBST,5%奶粉溶液為新配置試劑,低背景封閉液(貨號F00)及改進后的TBST緩沖液(貨號F05)按說明書提示為室溫長效保存試劑,故選取室溫放置7個月并在非無菌環境下反復打開操作過的試劑。

 

結果表明,奶粉溶液封閉30min,配合使用兩種靈敏度較高的發光液,將產生很強的背景信號,而低背景封閉液則可通過較短時間封閉高效降低背景,改進后的TBST緩沖液可在一定程度進一步降低背景。超敏發光液可在更短的時間內獲得其他發光液長時間曝光才能獲得的信號強度。