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western blot實驗中的常見問題與解決方案
所屬分類:western blot實驗中的常見問題與解決方案

產品型號:western blot實驗中的常見問題與解決方案

產品介紹
 

western blot實驗中的常見問題與解決方案

 

出現問題

產生原因

解決辦法

產品獲得

目標條帶信號不強或者沒有

1,發光液靈敏度不夠

推薦使用本公司發光液,超高靈敏,超低背景,支持長時間曝光,可檢測低至15飛克抗原,支持室溫保存。靈敏性超越Pierce,Millipore最高端產品416

詳細產品資料鏈接http://www.inpactoproducoes.com/pro-31.html

 

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2,二抗活性喪失

推薦本公司羊抗兔,羊抗鼠及兔鼠通用無背景二抗,可使用本公司雙功能預染marker25kd質控二抗活性。

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3,曝光時間不夠

增加曝光時間,并使用本公司超敏發光液,因為很多同類產品發光性能隨時間迅速衰減,客戶可測試我們的發光液發光4個小時候后信號仍無衰減。

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4,一二抗反應時間不充分

一般一抗過夜,二抗2小時,推薦使用本公司快速封閉及抗體稀釋液,可加速反應過程,并保持抗體長時間撫育過程中的活性。

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5,一抗失活或者本身親和力不足

推薦重新購買抗體或者選擇本公司500元小量抗體快速制備服務

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6,轉膜有問題,抗原穿膜或者仍在膠上未轉移

推薦本公司預制膠和電泳轉膜通用緩沖液,1個半小時僅使用一種緩沖液完成電泳轉膜全部工作,100%實現轉膜,并且無需冰浴和甲醇。

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7,樣品濃度太低或嚴重降解

推薦使用本公司抗干擾5分鐘定量或BCA檢測試劑進行快速定量,使得每條泳道蛋白總量在40ug,如果已有樣品確實蛋白含量太低,推薦使用本公司抗降解組織高效裂解液或手持式組織裂解儀重新獲得高質量樣品。

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8,電泳電極插反,轉膜時膠和膜順序放反,轉印膜保護紙沒撥開,顯影液定影液,X光膠片失效

推薦使用本公司雙功能預染marker,利用膠上顯色監控電泳和轉膜質量,利用25kd信號監控western系統靈敏性和穩定性,利用70kd信號監控一二抗濃度產生的非特異信號。

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Western整個膜比較黑或者比較臟

1,封閉不徹底或者封閉液染菌變質

推薦使用本公司10分鐘低背景快速封閉及抗體稀釋液,室溫操作和保存不變質,只需十分鐘封閉即可完成高效封閉,有效保存抗體活性,可回收抗體重復使用

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2,漂洗不徹底或者漂洗液染菌變質

增加快速預漂洗步驟,之后慢速,漂洗三次每次10分鐘,或使用本公司高效漂洗液實現高效漂洗和室溫不變質

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3,一抗未實現抗原親和純化,二抗標記物比例不對或活化位點封閉不徹底

推薦本公司抗原親和純化抗體服務,或本公司普通二抗或兔鼠通用二抗,按照固定用量操作即可。

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4,發光液本身不穩定本底高

有些品牌發光液AB液混合不加入酶也會產生本底,推薦使用本公司高穩定超敏發光液。

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雜帶非常多

1,主要問題是一抗質量,抗體制備所用抗原盡量要接近單表位,并且抗原純度要在95%以上,最后必須抗原親和純化。

更換一抗,或接受本公司1400元單表位抗體制備服務,只需要提供蛋白質序列即可實現高特異性抗體。

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2,次要原因是封閉和漂洗不徹底,本地提高后高峰度抗原的雜帶信號顯示出來

推薦本公司10分鐘快速封閉液和高效漂洗液??梢欢ǔ潭冉档痛藛栴}。

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Western帶型扭曲,模糊,拖帶,或斑點

1,聚丙烯酰胺凝膠配置,放置產生質量問題,上樣緩沖液和電泳緩沖液變質

推薦本公司高穩定預制膠,可室溫存放一年,條帶壓縮更緊致。新型上樣緩沖液,沉降性更好,更高純度原料,TCEP替代傳統還原劑,室溫穩定。電泳電轉通用緩沖液,室溫穩定防變質。

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2,樣品不純含有顆粒物,漂浮物,或者樣品中的SDS質量不過關,比例不合適

推薦本公司IP,wb通用裂解液,包含8種抑制劑防止樣品降解。一步法樣品除雜質純化柱,一步離心去除顆粒和漂浮性雜質。新型上樣緩沖液使得樣品溶解度更高,電泳干擾更小。

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3,轉膜過程產生的發熱,緩沖能力,氣泡共同形成不穩定

推薦本公司電泳轉膜通用緩沖液,高穩定防變質,電泳后直接濕轉或半干轉,不需冰浴不需甲醇,一個半小時完成電泳到電轉全部過程。另外推薦預切NC,pvdf膜,預切厚濾紙,高效除氣泡工具,防污染曝光夾膜,四產品一體組合套裝,簡化操作,杜絕氣泡,保證轉膜電場的均勻。

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